“scRNA-seq”到底有多少方法？

1、单细胞转录组建库方法分类目前单细胞转录组的建库方法基本可以按照技术方案分为两类：1）一类依赖于孔板通俗的说，就是将已经解离的单个细胞分配到孔板中各自的孔中，在孔中单个细胞完成裂解、RNA富集、加细胞条码(cellbarcode)和单分子识别码(UMI)等步骤后再收集到一起进行测序。而具体的实施方案会根据每种建库方案有一些特色型的变动。目前这一类方法包括CEL-seq、CEL-seq2、SMART-seq、SMART-seq2、Microwell-seq等。特点:a.基于孔...

什么是荧光定量PCR?

实时荧光定量PCR（Real-timeqPCR）是指在PCR反应中加入荧光基团，通过连续监测荧光信号出现的先后顺序以及信号强弱的变化，即时分析目的基因的初始量的一种PCR技术。一、荧光化学物质Real-timeqPCR所使用荧光化学物质有荧光染料和荧光探针两类。1、荧光染料目前主要使用的荧光染料是SYBRGreenI，SYBRGreenI是一种嵌入型花箐染料，在488nm（蓝光）照射激发后，在522nm（绿光）具有发射高峰。SYBRGreenI是嵌在DNA螺旋的小沟里面的，一...

教你用荧光定量PCR仪？（ABI 7500）

打开电脑及仪器电源，双击电脑桌面上的7500software图标打开程序。图片来源：网络软件主界面：图片来源：7500/7500FastReal-TimePCRSystemGETTINGSTARTEDGUIDE实验设置：a.实验名称b.仪器型号c.实验目的：定量、Genotyping(基因分型)、定性（有/无）d.定量类型：标准曲线、相对标准曲线、相对定量e.实验方法：探针法、染料法f.模板类型：gDNA、cDNAg.Target设置：Target包括目的基因、内参基因（多少...

PCR技术之父-凯利·穆利斯

部分友友还是搞不清楚PCR是个什么东西，搞不清楚为什么可以进行基因扩增，这一节我们就了解一下穆利斯与PCR技术的发现与发展。一、PCR的提出和发展1983年春天的一个周五晚上，穆利斯开车带着女友前往乡间度周末。在蜿蜒的乡间公路上开着车，一段DNA反复复制的景像，在他的脑海里冒了出来。事实上，DNA复制起始于DNA的解链，只需要通过加热让双链DNA变为单链DNA，然后再添加和单链DNA末端相结合的引物DNA，这样就开始了复制的过程，因此，只需要人为的给予其一些条件，就可以让DN...

NanoDrop One/OneC的UV-Vis模块检测

UV-Vis检测检测原理UV-Vis应用检测的波长范围从190nm到850nm，可以检测多达40个波长的吸收光，吸光度显示在屏幕上，并纳入检测报告。此模块功能可用于检测未知样品，确定最佳吸收波长，或者检测拥有多个吸收峰的样品。操作流程1、在“主页”屏幕上，选择用户自定义选项卡，然后点击UV-Vis；2、选定最多40个待监测波长（或者您也可以在检测完成后，再选定波长），以及是否使用自动化光程调整、分析波长和基线矫正；3、吸取2μL空白对照溶液滴加到基座上，降下检测臂（或将加入空...

POCT质谱的希望之旅

POCT质谱的希望之旅自POCT概念出现之后，其给予了所有分散式检验需求的用户于充分的满足，成为继生化、免疫、分子诊断之后的第四个IVD赛道，并正在高速冲击未来的IVD市场总量。POCT使得检测工作从实验室扩散到任何有需求的实地场景，这也使得灵敏度、准确度等一些指标被弱化，但在新冠和呼吸道疾病“盛行”中的防治过程中，其作用贡献已远超指标弱化带来的问题。不仅如此，这些年分子POCT、质谱POCT及其他技术融合POCT产品井喷式出现，使得POCT的潜力进一步被发现，如果解决了大部...

PCR程序设置和什么有关？影响大么？

PCR程序设置和什么有关？影响大么？一旦确定了合适的DNA起始量和PCR组分，就必须设定PCR循环和运行参数，从而确保高效扩增。DNA聚合酶的特点、PCR缓冲液的类型、模板DNA的复杂程度都会影响反应条件的设置。1、起始高温变性步骤在PCR起始阶段，通常是在94–98℃下孵育1-3min将双链DNA模板解离成单链，从而使引物可与目标区域结合并开始延伸。此步的高温条件使起始DNA变性，确保在第一个扩增循环期间实现有效的目标序列扩增，此外也有助于使样品中可能存在的热不稳定性蛋白酶...

教你使用NanoDrop One

一、基本仪器操作1、NanoDropOne主页屏幕2、NanoDropOne检测屏幕3、NanoDropOne常规操作二、检测核酸（双链DNA、单链DNA或RNA）开始使用NanoDropOne仪器进行基座检测之前，抬起仪器检测臂然后清洁上下基座。至少需使用新的实验室无尘纸擦拭基座。1.在“主页”屏幕上，选择核酸选项卡并点击双链DNA、单链DNA或RNA，根据要检测的样品而定。2.将1-2μL空白检测溶液移取到下基座，然后降下检测臂。3.点击空白检测并等待检测完成。如果自动空...